Уважаемые коллеги! Мы столкнулись с проблемой в определении наличия металлобеталактамаз фенотипическим методом: вокруг диска с ЭДТА образуется собственная зона подавления роста. Приготовление рабочего раствора ЭДТА совершали следующим способом: 18,615 г препарата (Трилон Б) растворяли в 100 мл дистиллированной воды. Учитывая, что ЭДТА растворяется при рН 8,0, навеску препарата предварительно суспензировали в 80 мл дистиллированной воды и затем, под контролем рН-метра или универсальной индикаторной бумажки, добавляли по каплям концентрированный раствор nаОН до рН 8,0 (при постоянном помешивании). После полного растворения ЭДТА объем жидкости доводтли до 100 мл дистиллированной водой. Полученный основной раствор ЭДТА храним в холодильнике при температуре 2-8°С до использования. Убедительная просьба указать на каком этапе совершаем ошибку?
Сотрудник НИИАХ Posts: 83
Уважаемые коллеги,
Судя по описанию, раствор ЭДТА Вы готовите правильно.
Небольшая зона задержки роста вокруг диска с ЭДТА действительно может возникать при тестировании отдельных штаммов синегнойной палочки и некоторых других МО. Эта проблема связана с тем, что ЭДТА обладает собственной токсичностью, изменяя проницаемость клеточной стенки и воздействуя на другие процессы в бактериальной клетке. Некоторые штаммы проявляют повышенную чувствительность к ЭДТА (по нашим наблюдениям ~10-15% P.aeruginosa из более 2000 протестированных культур). Как правило, наличие небольшой зоны вокруг диска не мешает детекции МБЛ, но если зона превышает 10-11 мм, можно уменьшить объем наносимого на диск 0,5М раствора ЭДТА до 5 микролитров (это объем, который мы используем в настоящее время рутинно в нашей лаборатории).
К сожалению, похожие проблемы могут возникать и с любыми другими ингибиторами МБЛ, например, с тиолами, в меньшей степени, с дипиколиновой кислотой.
С уважением,
зав. лабораторией молекулярной микробиологии НИИАХ
к.б.н. М.В. Эйдельштейн
