Уважаемые коллеги!
На VII конференции МАКМАХ Д. Карналиа на лекции о карбапенемазах говорил о тестах, которые можно провести у P.aeruginosa на наличие карбапенемаз. Кажется, метод двойных дисков с имипенемом и EDTA? (не успели записать).
Расскажите, пожалуйста, подробнее о тестах (с дисками) которые можно поставить на наличие карбапенемгидролизующих ферментов у грамотрицательной госпитальной микрофлоры (P.aeruginosa, Acinetobacter).
Сотрудник НИИАХ Posts: 83
Судя по всему, речь идёт о карбапенемазах, принадлежащих к молекулярному классу В метало-бета-лактамаз (классификация R.Ambler). Фенотипическое выявление металлокарбапенемаз грам-отрицательных бактерий часто осуществляется с помощью простого диско-диффузионного теста. Принцип метода заключается в использовании двух типов дисков: один с соответствующим антибиотиком (чаще имипенем или меропенем), другой с ингибитором (любой хелатирующий агент, чаще ЭДТА или 2-меркаптопропионовая кислота). Вывод о присутствии металлокарбапенемаз делается на основании разницы между величинами зон задержки роста культуры вокруг дисков. Существуют различные модификации в реализации этого метода. Либо это вариант, когда используется два диска с антибиотиком, на один из которых дополнительно наносится ингибитор и, таким образом, оценивается степень уменьшения зоны роста вокруг диска с хелатором по сравнению с диском, содержащим только антибиотик. Либо выполняется вариант, когда диски, содержащие только антибиотик и только ингибитор, помещаются на определённом расстоянии друг от друга, а интерпретация результатов осуществляется на основании наличия или отсутствия расширения зоны задержки роста культуры между дисками.
Литература:
Lee K, Lim YS, Yong D, Yum JH, Chong Y. Evaluation of the Hodge test and the imipenem-EDTA double-disk synergy test for differentiating metallo-beta-lactamase-producing isolates of Pseudomonas spp. and Acinetobacter spp.
J Clin Microbiol. 2003 Oct;41(10):4623-9.
Yong D, Lee K, Yum JH, Shin HB, Rossolini GM, Chong Y. Imipenem-EDTA disk method for differentiation of metallo-beta-lactamase-producing clinical isolates of Pseudomonas spp. and Acinetobacter spp.
J Clin Microbiol. 2002 Oct;40(10):3798-801.
Arakawa Y, Shibata N, Shibayama K, Kurokawa H, Yagi T, Fujiwara H, Goto M. Convenient test for screening metallo-beta-lactamase-producing gram-negative bacteria by using thiol compounds.
J Clin Microbiol. 2000 Jan;38(1):40-3.
Уважаемые коллеги!
Где можно заказать коммерческие диски с с ингибитором (любой хелатирующий агент, ЭДТА или 2-меркаптопропионовая кислота) для постановки теста на карбапенемазы?
Сотрудник НИИАХ Posts: 83
Уважаемый коллега,
К сожалению, на настоящий момент ни одна коммерческая компании не занимается выпуском готовых к применению дисков, пропитанных такими хелатирующими агентами как ЭДТА и 2-меркаптопропионовая кислота. Данные диски готовят ex tempore при постановке МбетаЛ-теста, например, смачивая пустой диск 10мкл раствора ЭДТА (0.5М, рН 8.0).
Помимо перечисленных хелаторов, для ингибирования металло-β-лактамазной активности возможно использовать такие реагенты как CuCl2, FeCl2, меркаптоуксусная кислота, меркаптоэтанол. Есть сообщение о том, что японская компания Eiken Chemical Co. (http://www.eiken.co.jp/en/) выпускает коммерческий диск, содержащий 3мкг натриевой соли меркаптоуксусной кислоты (SMA).
Однако, исследованиями, проведенными рядом европейских референтных лабораторий, показано, что ЭДТА является предпочтельным хелатирующим агентом, дающим наиболее достоверные и воспроизводимые результаты при постановке метода «двойных дисков» для фенотипического выявления металло-бета-лактамаз.
